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实验室质控菌株复苏保存相关常见问答

发布时间:2019-09-11    浏览次数:253

微生物实验室如果从事致病菌检测、培养基质控验收、方法验证等相关工作,就应该备有质控菌株。实验室需对使用的质控菌株进行规范性管理,以便有效地、安全地使用,保证实验结果的准确性,今天环凯为大家总结了实验室质控菌株复苏保存过程中常见的问题。

1. 菌株保存的是第三代,-80℃保存,再取出来活化的话属于第几代?

保存的是第三代复活出来后,如果采用平板或肉汤活化相当于转接了一代,就是第四代了,如果还在瓷珠里的话就还是原来的代数。如果是保存在斜面上,这一支斜面一直就是第三代,如果转接到另一支斜面就是第四代了。传代原则,菌株活化复苏不论以任何形式繁殖了一次就算是传了一代。但如果仅是物理位置的转移没有繁殖就不是传代,需要注意。

2. 菌株传代保存到瓷珠里一定要挑单菌落吗?

不一定非挑单菌落,但是一定要挑相同特征的菌落,就是说从同一个菌落纯化出来的,以保证它们的特性完全一致。原则是尽量多挑,宁多勿少。

3. 菌株冷冻保存是-70℃还是-80℃有具体标准规定么?

其实是有标准的,《SN/T 2632-2010 微生物菌株常规保藏技术规程》是关于菌株保藏的一个标准,大家可以学习一下,各个保存方式都有介绍,但是瓷珠是比较新兴的保存方式暂时里面还没有收录。

4. 怎样延长菌株的保存时间呢?

大量的实验证明菌株在低温、干燥、缺氧、缺营养的条件下保存效果是最好的,越接近这种保存条件,菌株的保存时间越长。

5. 怎样纯化菌株?

纯化就是从TSA上或别的非选择性平板上转挑取单菌落划线再分离出单菌落,这就相当于纯化了。

6. 我们只保存第一代菌株是不是要重新传代保存呢,认证老师会不会认为这是个错误?

应该不会,认证老师不会提出这种问题的,不过最好是第一代菌株保存一些、第二代菌株保存一些,使用时工作菌株最好使用第三代菌株,第一代菌株可作为长期保存用。

7. 为何要将第三代作为工作菌株?

多传代几次后菌株的活力会明显提高,但最多传代到第五代后就不能用了,因为第五代后菌株虽然不会完全变异,但变异率会明显增加,因此选用第三代作为工作菌株是比较合适的,若使用第一、第二代菌株活力没有那么强。

8. 质控菌株是不是传代超过五代就必须销毁处理?

不一定。传代超过五代只是存在菌种变异可能,但如果传代到第六代、第七代……,经过形态、生化特性、DNA特征等验证,性状保持稳定,那么这些五代后的菌还是可以正常使用。

9. 菌种编号意义?

以金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003为例CMCC为中国医学菌种保藏中心缩写,其它常见菌种保藏中心还包括ATCC(美国标准菌种收藏所)、CICC(工业微生物菌种保藏中心)、FSCC(食品安全菌种保藏中心);B的意思是细菌,对应还有F(真菌);26003为CMCC的保藏编号。

10. 同样是金黄色葡萄球菌,ATCC6538与ATCC25923有什么不同?

表明其来源不同,生化特性有也有所不同。比如ATCC6538溶血能力较ATCC25923要强。

11. 使用磁珠保藏管保存质控菌株,加入菌液摇匀后为什么要吸干菌液?

防止剩余菌液冷冻后形成冰晶损伤保存的菌株。

12. TSA斜面一般多少度保存,可以放在冷藏里吗?

2-8℃保存,放在冷藏是可以的;注意弧菌和绿脓杆菌要放到室温20-25℃保存,否则会很快死亡。

13. 复苏冻干菌株是否可以采用液体培养基?

可以,但建议使用平板培养基复苏冻干菌株。有助于分辨复苏出来菌株是否有污染,同时可初步观察菌落形态以鉴定菌株纯度。使用液体复苏的话只能观察到培养基混浊,无法确定是否有污染。

14. 复苏冻干菌株是否可以采用显色培养基?

不建议采用显色培养基复苏冻干菌株。冻干菌株复苏需要一个最适生长环境,复苏培养基不能选用选择性培养基或显色培养基,这些培养基里面含有抑菌成分不利于菌株复苏。

15. 产气荚膜梭菌做冻存时是否需要保持厌氧状态?

不需要,产气荚膜梭菌虽属厌氧性细菌,但对厌氧程度要求并不太严格,按照一般菌株冻存方法进行冻存即可。

菌种保藏





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